Actinobacillus pleuropneumoniae (APP)와 인플루엔자 A(H1N1) 바이러스의 공감염은 돼지 호흡기 질환 진단에 있어 심각한 도전 과제를 제기하며, 효과적인 발병 관리와 통제를 복잡하게 만듭니다. 본 연구는 Coyote Flash10 휴대용 자동 검출 시스템에 최적화된 새로운 이중 TaqMan 실시간 PCR 분석법의 개발과 검증에 대해 보고하고 있으며, 이는 두 병원체의 동시 식별 및 정량화를 가능합니다. 이 분석법은 APP의 apxIVA 독소 유전자와 H1N1의 보존된 매트릭스(M) 유전자에 특이적인 프라이머와 프로브를 사용하며, 내부 대조군으로 돼지 RNase P를 적용합니다. 재조합 플라스미드 표준을 사용한 검증 결과, 각 표적에 대해 1 copy/μL의 민감도를 보였고, 강한 선형 상관 관계(r2 > 0.99)를 나타냈습니다. 계산된 증폭 효율성(APP: 121.6%; H1N1: 118.6%)은 일반적인 90-110% 범위를 약간 상회했지만, 분석에서 강력하고 일관된 정량화를 보였으며, 반응 경쟁에 대한 증거는 없었습니다. 시뮬레이션 된 임상 매트릭스에서 APP 및 H1N1에 대한 검출 한계는 각각 10,000배 및 100배 희석을 상응했습니다. 이 방법은 우수한 반복성(시험 내 CV <3%)과 높은 특이성을 보였으며, 여섯 가지 다른 일반적인 돼지 호흡기 병원체에 대해 교차 반응을 보이지 않았습니다. 이 빠르고 밀봉된 튜브 방식의 분석법은 1시간 이내에 완전한 결과를 제공하며, 살균 포인트에서의 감시 및 복잡한 호흡기 공동 감염의 차별적 진단을 위한 실용적인 현장 호환 솔루션을 제공합니다. 본 연구의 주요 한계는 시뮬레이션 된 샘플을 주로 사용하여 검증이 수행되었다는 것이며, 진정한 임상 샘플을 통한 향후 검증이 이 방법의 임상적 유용성을 더욱 확증할 것입니다.