돼지 유행성 폐렴의 주요 원인균인 Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae)는 돼지 산업에 상당한 경제적 손실을 초래합니다. 이 까다로운 병원체는 시험관 내에서 매우 느리게 성장하여 정량화를 복잡하게 만듭니다. 색 변화 단위(CCU), 집락 형성 단위(CFU), 유세포 분석 및 ATP 발광법을 비롯한 여러 정량화 방법이 문헌에 기록되어 있으며, CCU가 표준으로 간주됩니다. 그러나 이러한 기술들 간의 상관관계는 철저히 평가되지 않았습니다. 또한, propidium monoazide(PMA) 또는 ethidium monoazide(EMA)를 사용하는 생존 정량 중합효소 연쇄 반응(v-qPCR)은 생존 세균을 감지하는 빠르고 민감한 대안입니다. 본 연구는 M. hyopneumoniae를 정량화하기 위한 다양한 방법을 평가하고 비교하여 정확한 실시간 정량 방법을 검증하고, 이 까다로운 병원체에 맞는 v-qPCR 분석법을 개발하는 데 목적이 있습니다. 세 가지 M. hyopneumoniae 균주(232, J, 2010)의 시험관 내 성장 동력학을 CCU, CFU, 유세포 분석 및 ATP 발광법을 사용하여 평가했습니다. 배양 배지에서 직접 M. hyopneumoniae를 정량화하기 위해 공초점 레이저 주사 현미경(CLSM) 프로토콜을 구축하고, 유세포 분석 기반 정량화를 통제된 조건에서 검증했습니다. 마지막으로, 생존 M. hyopneumoniae를 정량화하기 위한 신속한 v-qPCR 분석법을 개발 및 최적화하였습니다. CFU, CCU, 유세포 분석, ATP 발광법으로 M. hyopneumoniae 성장 동력학을 비교한 결과 유사한 성장 동력학과 높은 분석 상관관계를 보였습니다. 유세포 분석 및 CLSM 정량화는 균주 232에 대해 강한 상관관계(r = 0.9973)를, 균주 J에 대해서는 중간 상관관계(r = 0.8933)를 보여주었습니다. v-qPCR에 의한 살아있는 M. hyopneumoniae 검출은 유세포 분석으로 검출된 생존 세포 수와 강하게 상관되었습니다(R² 값: 232: 0.9726; J: 0.8628; 2010: 0.9933, p < 0.05). 참조 균주 232의 v-qPCR 분석법에 대한 검출 한계는 5 × 10⁴ 생존 M. hyopneumoniae 세포/mL였습니다. 본 연구는 마이코플라즈마 종에 대한 최초의 검증된 PMA 기반 v-qPCR 분석법을 제시하며, 생존 및 비생존 M. hyopneumoniae 세포를 신속하고 정확하게 구분할 수 있는 유세포 분석 및 CLSM 프로토콜을 확립하였습니다. 이 방법들은 CCU나 CFU에 의해 요구되는 4주에서 몇 시간으로 정량화 시간을 크게 줄입니다. 또한 임상 표본에서 검증되면, v-qPCR은 M. hyopneumoniae 박멸 프로그램에 소중한 도구로 활용될 수 있습니다.