재조합 파파인 유사 프로테아제(EV-G-PLP)를 보유한 엔테로바이러스 G의 출현은 인수공통 감염 가능성을 가진 전 세계의 돼지 건강에 중대한 위협이 되고 있다. 이러한 대상을 치료할 수 있는 방법의 부족을 해결하기 위해, 우리는 CH/20GXNN/PLP2020의 역유전학 시스템을 개발하고, 정밀 PLP 유전자 대체를 통해 세 가지 동형 리포터 재조합체(GFP/RFP/iLOV)를 생성하였다. 바이러스 후손은 GFP/RFP 변종과 비교했을 때 r20GXNN-iLOV가 유전적 안정성을 나타내며(10번 이상의 연속 세대를 통해), 부모와 같은 복제 동역학을 보였다. 플라크 표현형 분석은 2C/3A 접합부에서 플라크 크기와 삽입 길이 사이의 반비례 관계를 드러냈다. 이 시스템을 활용하여, 우리는 네 가지 항-EV-G 화합물(니클로사마이드 0.02 µM, 살리노마이신 2 µM, 클로로퀸 포스페이트 12 µM, 리바비린 400 µM)을 식별하는 고처리량 스크리닝 플랫폼을 설계하였다. 본 연구는 피코르나바이러스 연구 발전을 가능하게 하는 역유전학 플랫폼을 확립하고, 항바이러스 스크리닝을 촉진하는 2C/3A 접합부의 구조적 가변성을 밝힌다. 더 나아가, EV-G 특이적 약물 후보를 식별하면서, 파나 피코르나바이러스(포함 EV-A71) 화합물 발견을 위한 틀을 제공한다.