연령 관련 황반 변성(AMD)은 서구 국가에서 실명의 주요 원인입니다. 특정 병리 경로를 다루는 AMD 모델이 필요합니다. 본 연구를 통해 AMD 관련 모델에서 RPE 장벽 및 극성에 적합한 극성화된 돼지 단일안구 망막 색소 상피(RPE) 준비에 대한 최적의 프로토콜이 확립되었습니다. 단일안구 돼지 1차 RPE 세포는 12개의 웰 플레이트와 Transwell 삽입물에 준비되었습니다. 이 모델의 최적 배양 조건을 찾기 위해 다양한 코팅(라미닌(Lam), 폴리-ᴅ-리신(PDL), 피브로넥틴(Fn) 및 콜라겐) 및 혈청 함량(1%, 5%, 10%)이 조사되었습니다. 배양 성공률, 세포 수(트리판 블루 배제 검사), 형태/형태 계측(광학 및 형광 현미경), 단백질 분비/표현(ELISA, Western blot), 유전자 발현(qPCR), 상피 전기 저항(TEER) 및 베스트로핀 1(BEST1)의 극성 위치는 냉동 절편화를 통해 평가되었습니다. Lam에 시드된 세포는 최고 수준의 상피 세포와 밀집 특성을 보였습니다. Fn은 가장 높은 세포 성장 수를 보였습니다. Lam과 Fn은 가장 높은 배양 성공률을 보였습니다. TEER 값과 혈관 내피 성장 인자 분비는 Lam을 사용했을 때 가장 높았습니다. 최초로, Transwell 돼지 단일안구 RPE 형태 계수 매개 변수가 결정되었습니다. Lam 위의 RPE는 더 크고 다양한 형태의 세포를 보였습니다. CIV는 가장 낮은 클라우딘 19 발현을 보였습니다. Lam 코팅으로 BEST1의 기저측 발현이 가장 높았습니다. 혈청이 높을수록 세포 수 증가와 밀집 성공률이 높았습니다. Lam에서 혈청 감소는 RPE 형태에 긍정적인 결과를 보였고, 형태 계측은 안정적으로 유지되었습니다. Lam에서 5% 혈청은 가장 높은 배양 성공률과 최상의 장벽 특성을 보였습니다. 10% 혈청을 사용하면 RPE65 발현이 감소했습니다. 종합적으로, Transwell 삽입물에 가장 적합한 코팅은 Lam였으며, 혈청을 5%로 줄이는 것과 28일간의 배양 기간이 권장됩니다. 검증된 매개 변수를 가진 극성 돼지 단일안구 배양의 사용을 위한 프로토콜이 확립되어 제공됩니다.