신규 효소를 식별하고 그 작용 방식(및 억제)을 이해하는 것은 신약 개발의 중요한 단계입니다. 이 장에서는 활성 기반 단백질 프로파일링(ABPP)의 정밀성과 마이크로플레이트 분석 기술의 효율성을 결합하여 이 프로세스를 가속화하는 새로운 방법론을 설명합니다. 이 접근법의 중심에는 억제제와 효소 간의 상호작용을 직접 관찰하고 특징화하기 위해 활성 기반 탐침(ABP)을 사용하는 경쟁적 ABPP가 있습니다. 본 연구에서는 내제된 불화인산(FP) 기반 탐침을 전기친화적 탐침의 예로 사용하고 모델 효소로 돼지 간 에스터라제(PLE)를 사용합니다. 스트렙타비드인 태그를 도입하기 위한 PLE의 간단한 화학적 수정을 통해 이를 생바이오틴화된 분석 플레이트에 고정하고 제시할 수 있게 합니다. 이후 FP 탐침과 상업적으로 유도된 화합물 라이브러리를 사용한 경쟁적 ABPP 실험을 동시에 실행할 수 있습니다. 이 설정은 새로운 억제제를 식별하고 IC50 값을 단일 작업에서 추정할 수 있게 합니다. 이 장은 ABPP 탐침의 합성, 효소 용액의 준비, 플레이트 기반 분석의 수행을 위한 종합적인 프로토콜을 제공합니다. 이는 구조 또는 기질 특성이 알려지지 않은 효소의 신규 억제제를 발견하고 특성화하는 데 있어 견고한 플랫폼을 제공합니다. 이 기술을 적용함으로써 잠재적인 신약 후보 물질의 식별을 가속화할 뿐만 아니라 그 작용 방식에 대한 심층적인 통찰을 얻어 그 치료적 잠재력에 대한 이해를 높일 수 있습니다.