In vitro 림프구 증식 분석은 면역 반응 평가와 항증식 약물 효능을 평가하는 데 필수적입니다. 이러한 분석은 항원 제시 또는 미토겐 자극에 의존하며, 성능은 시약 농도와 배양 시간에 의해 결정됩니다. 비장 세포가 자주 사용되지만, 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs)는 더 접근하기 쉽고 실용적인 샘플링을 제공합니다. 그러나 돼지 PBMC 증식에 대한 견고한 배치 분석을 제공하는 간소화된 프로토콜이 부족했습니다. 따라서 우리는 5 μg/mL의 concanavalin A (ConA)를 사용하여 동결 보존된 돼지 PBMC에서 증식을 유도하기 위한 상세한 워크플로를 개발했습니다. 프로토콜은 세포 분리, 동결 보존, ConA 자극, CD4+ T 세포 염색, Attune NxT 기기를 사용한 유세포 분석과 게이팅, FCS ExpressTM 7.18을 이용한 배치 분석을 포함합니다. 이 접근 방식은 78.9%의 생존 가능한 세포를 산출했으며, 이 중 33.8%는 CD4+ 림프구였습니다. 또한, 세포의 93.9%(n = 216)가 증식했으며, 최대 9세대 세포를 생성했습니다. FCS ExpressTM 7.18을 사용한 배치 분석은 증식 지표의 정확성과 해석을 향상시켰습니다. 이 검증된 프로토콜은 돼지 면역학 연구에서 일관된 증식 데이터를 생성하기 위한 신뢰할 수 있는 프레임워크를 제공합니다.