간염 E 바이러스(HEV) 감염은 날것 또는 덜 익힌 돼지고기 제품 섭취를 통해 사람에게 전염될 수 있는 출현하는 인수공통감염증입니다. 음식을 통한 바이러스 검출을 위한 여러 방법이 설명되었으나 정성적 및 정량적 성능 특성에 대한 데이터는 많지 않습니다. 본 연구에서는 이전에 발표된 프로토콜을 결합하여 돼지고기 소시지에서 HEV를 정량적으로 검출하기 위한 최적화 방법을 개발하였습니다. 이 방법은 삼중 시약과 1-브로모-3-클로로프로판을 사용한 샘플 파괴 및 상 분리를 활용한 후, 이소프로판올 침전법으로 RNA를 농축합니다. 이 방법은 역전사 정량 실시간 PCR (RT-qPCR) 및 역전사 드롭릿 디지털 PCR (RT-ddPCR)에 사용할 수 있도록 검증되었습니다. 검출 한계 및 정량화 한계는 RT-qPCR과 RT-ddPCR 모두에서 200 copies/g으로 나타났습니다. RT-ddPCR 기술은 이전에 RT-qPCR보다 더 정밀한 대안으로 가능성을 보여주었으나, 본 방법에서 RT-qPCR 대신 RT-ddPCR을 사용하여 성능이 향상되었다는 증거는 없었습니다. 추가적으로, WHO 국제 표준 및 HEV RNA 참조 패널을 사용하여 HEV RT-PCR 분석의 성능을 검증하였습니다. 마지막으로, 다양한 RNA 농축 프로토콜과 RT-PCR 검출 전략의 조합을 평가했습니다. 이는 바이러스 RNA의 이소프로판올 침전이 저해물질 내성이 있는 RT-qPCR 검출 전략을 사용할 때 자기 실리카 비드 기반 추출보다 최소 두 배 효율적임을 보여주었습니다. 요약하면, 우리는 돼지고기 소시지에서 HEV를 정량적으로 검출하기 위한 효율적이고 잘 특성화된 방법을 제시합니다. 이러한 방법은 위험성 평가와 식품 모니터링을 위한 고품질 데이터를 제공하는 데 가치가 있습니다.
Key Points
- 간염 E 바이러스(HEV)는 날것 또는 덜 익힌 돼지고기를 통한 전염 가능한 인수공통감염증입니다.
- 이 연구에서는 돼지고기 소시지에서 HEV를 정량적으로 검출하기 위한 최적화된 방법을 개발 및 검증했습니다.
- 이소프로판올 침전을 통해 바이러스 RNA를 효과적으로 농축할 수 있으며, 이러한 방법은 위험성 평가와 식품 모니터링에 중요한 고품질 데이터를 제공합니다.