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아프리카돼지열병 바이러스 A238L 단백질에 대한 단클론 항체의 준비 및 에피토프 매핑

2025-05-02 19:01 | 추천 : 0 | 댓글 : 0
아프리카돼지열병 (ASF)은 아프리카돼지열병 바이러스 (ASFV)로 인해 발생하는 치명적인 감염병으로, 돼지 산업에 큰 타격을 주었습니다. 현재 이 질병을 통제할 효과적인 백신이나 약물은 없습니다. A238L은 아프리카돼지열병 바이러스의 비구조적 단백질로, 체내에서 바이러스의 면역 회피에 관여합니다. 본 연구에서는 A238L 단백질의 원핵 발현 플라스미드인 pET-28a (+)-A238L을 구성하였으며, 유도 발현과 정제를 통해 A238L 단백질을 얻었습니다. 이 단백질로 마우스를 면역화한 후, A238L 단백질에 특이적인 단클론 항체를 선별했습니다. 최종적으로 단백질에 대한 단클론 항체를 안정적으로 분비할 수 있는 5개의 하이브리도마 세포 클론을 얻었으며, 복수 배양액의 역가는 1:100,000에서 1:500,000까지 다양했습니다. 다섯 가지 단클론 항체 중 세 가지는 IgM 중쇄를 보여주었으며, 나머지 두 가지는 kappa 경쇄와 함께 IgG1 중쇄를 나타냈습니다. 펩타이드 스캔 방법을 사용하여 세 가지 단클론 항체 (6EA10B4D7, 6EC2D8E8, 6EB1D2B8)가 인식하는 A238L 단백질의 B 세포 선형 에피토프의 위치를 효과적으로 식별했습니다: 181-LSTCISLFTS-190. 그 후 예측된 단백질 삼차 구조 내에서 에피토프 영역을 시각화했습니다. 중요한 것은 서열 보존 분석을 통해 이 에피토프 서열이 여러 ASFV 계통에 걸쳐 높은 보존도를 유지하고 있음을 밝혀냈습니다. 따라서 본 연구에서 생성된 단클론 항체는 A238L 단백질의 생물학적 기능 연구 및 ASFV의 혈청학적 검출 강화에 중요한 참고자료로 사용될 것입니다.
Key Points
  • A238L 단백질은 아프리카돼지열병 바이러스의 면역 회피에 관여하는 비구조적 단백질로, 본 연구에서는 이 단백질의 단클론 항체를 발굴했습니다.
  • 마우스를 면역화하여 5가지의 하이브리도마 세포 클론을 확보했으며, 이들은 단백질에 대한 단클론 항체를 안정적으로 분비했습니다.
  • 에피토프 매핑을 통해 세 가지 단클론 항체가 인식하는 B 세포 선형 에피토프 위치를 식별했으며, 해당 서열이 여러 ASFV 계통에서 보존됨을 확인했습니다.