글래서병은 글라세렐라 파라수이스(G. parasuis)에 의해 발생하는 돼지 호흡기 감염성 질병으로, 양돈 산업에 막대한 경제적 손실을 초래합니다. 현재 글래서병 예방의 주요 방법은 불활화 백신의 사용이지만, 불활화 백신은 G. parasuis의 이종 혈청형 감염에 대한 보호 효과가 제한적이어서 전체적인 예방 효과에 한계가 있습니다. 본 연구에서는 교차 보호 효과가 향상된 G. parasuis 백신 개발을 위해 바이오인포매틱스 접근법을 활용하여 G. parasuis 항원 단백질(필리 소단위 A, 철공여 단백질 CyaY, ABC 수송체 기질 결합 단백질 A(HbpA), 세포독성 팽창 독소 소단위 B(CtdB))의 B세포, 세포독성 T림프구(CTL), 보조 T림프구(Th) 에피토프를 예측·분석하였습니다. 이 에피토프들은 링커(linker)와 절단 부위를 통해 연결하였고, 인트라스트랜드 어쥬번트를 추가하여 다중 에피토프 항원 Tzi를 제작하였습니다. 분자 도킹 및 면역계 시뮬레이션 결과, Tzi 다중 에피토프 단백질이 면역반응을 유발할 가능성이 있음을 확인하였습니다. 웨스턴 블롯 결과, Tzi는 G. parasuis의 6가지 혈청형(4, 5, 10, 12, 14 및 비정형) 항-마우스 혈청과 상호작용함을 보였습니다. In vitro 항균 실험에서는 Tzi에 대한 마우스 항혈청이 6가지 혈청형 G. parasuis에 대해 살균 활성을 나타냈습니다. 또한, Tzi로 면역된 마우스의 혈청 내 항체, 인터루킨-4(IL-4), 인터페론 감마(IFN-γ) 수치가 어쥬번트 대조군에 비해 유의하게 높았으며, 비장 및 폐 조직에서도 인터루킨-2(IL-2), IL-4, 인터루킨-12 서브유닛 알파(IL-12A), IFN-γ의 농도가 현저히 상승했습니다. Tzi로 면역된 마우스에 4, 5, 12형 G. parasuis를 공격 접종한 결과, 생존율은 각각 50%, 62.5%, 87.5%로 나타났습니다. 더불어, Tzi 면역군은 어쥬번트군에 비해 임상 증상 및 폐 조직 병변이 현저히 완화되었습니다. 전반적으로, 다중 에피토프 단백질 Tzi는 교차 면역원성을 나타내며, 마우스에서 체액성 및 세포성 면역반응을 효과적으로 유도하였고, G. parasuis 4, 5, 12형에 대해 강력한 교차 보호 효과를 보여, G. parasuis에 대한 유망한 서브유닛 백신 후보임을 시사합니다.