돼지 생식기호흡기증후군 바이러스(PRRSV)는 전 세계 돼지 산업에 심각한 위협을 가하는 주요 병원체입니다. 본 연구에서는 고병원성 PRRSV(HP-PRRSV) 균주를 이용하여 BAC 기반 역유전학 플랫폼을 구축하였습니다. 완전한 PRRSV-L251 유전체의 세 가지 다른 유전자 간 영역에 고도 형광 녹색 단백질(EGFP) 유전자를 삽입하여 세 가지 재조합 보고자 바이러스를 구축했습니다. 면역형광 분석, 바이러스 성장 동력학 및 보고자 유전자 안정성 평가를 결합한 결과, rL251-ORF4-5a-EGFP는 연속 통과 중에도 상대적으로 안정적인 발현을 유지했으며, 72시간 감염 후 바이러스 역가는 부모 바이러스와 비슷한 수준을 나타냈습니다. 이후 rPRRSV-L251-ORF4-5a-EGFP를 사용하여 항PRRSV 활성을 가진 네 가지 후보 화합물을 식별하였으며, 이는 이 플랫폼이 항바이러스 약물 스크리닝을 위한 시각적 평가 도구로 활용될 수 있음을 나타냅니다. 본 연구는 ORF4-5a 간격 영역이 외래 유전자 삽입을 위한 실행 가능하고 유망한 부위임을 입증하였고, PRRSV 백신 개발 및 병인 연구를 위한 견고한 기술 플랫폼을 제공하였습니다.