연령 관련 황반변성(AMD)은 서구 국가에서 실명의 주요 원인입니다. 특정 병리 학적 경로를 다루는 AMD 모델이 필요합니다. 본 연구를 통해 AMD 관련 RPE 장벽과 극성 모델을 위한 극화된 돼지 단안 망막 색소 상피(RPE) 준비를 위한 최적화 프로토콜이 확립되었습니다. 단안 돼지 초차 RPE 세포(한 눈당 하나의 웰에서)는 Transwell 인서트를 포함한 12웰 플레이트에 준비되었습니다. 최적의 배양 매개변수를 결정하기 위해 서로 다른 코팅(라미닌(Lam), 폴리-D-라이신(PDL), 피브로넥틴(Fn) 및 콜라겐)과 다양한 혈청 함량(1%, 5%, 10%)이 조사되었습니다. 배양 성공률, 세포 수(트립판 블루 배제 시험), 형태/형태학(광학 및 형광 현미경), 단백질 분비/발현(ELISA, Western blot), 유전자 발현(qPCR), 상피 전기 저항(TEER) 및 극화된 위치의 베스트로핀 1(BEST1) 확인은 냉동 절편법(IHC-Fr)으로 평가되었습니다. Lam에 배치된 세포는 가장 높은 상피 세포 수준과 밀집 특성을 보였습니다. Fn은 세포 수 성장에서 최고치를 기록했습니다. Lam과 Fn은 가장 높은 배양 성공률을 보였습니다. Lam을 사용할 때 TEER 값과 혈관 내피 성장 인자 분비가 가장 높았습니다. 처음으로 극화(Transwell)된 돼지 단안 RPE 형태학적 매개변수가 결정되었습니다. Lam에 있는 RPE는 더 큰 세포와 다양한 세포 형태를 보였습니다. CIV는 가장 낮은 클라우딘 19 발현을 보였습니다. BEST1의 최고 기저측 발현은 Lam 코팅을 사용하여 달성되었습니다. 혈청이 많을수록 세포 수 증가와 밀집 성공이 필요하며, Lam에서의 혈청 감소는 RPE 형태에 긍정적인 결과를 보였으나 형태학은 안정적으로 유지되었습니다. 5% 혈청을 사용한 Lam이 가장 높은 배양 성공률과 최상의 장벽 특성을 나타냈습니다. RPE65 발현은 10% 혈청 사용으로 감소되었습니다. 종합적으로, Transwell 인서트의 가장 적절한 코팅은 Lam이었으며, 혈청을 5%로 감소시키고 28일의 배양 기간을 권장합니다. 검증된 매개변수를 사용하여 극화된 돼지 단안 배양의 프로토콜이 확립되었으며, 여기에 제공됩니다.