새로운 효소를 식별하고 그들의 작용 방식(및 억제)에 대한 통찰력을 얻는 것은 신약 개발의 중요한 단계입니다. 본 장에서는 활동 기반 단백질 프로파일링(ABPP)의 정밀성과 마이크로플레이트 분석 기술의 효율성을 결합하여 이 과정을 가속화하는 새로운 방법론을 설명합니다. 이 접근법의 핵심은 경쟁적 활동 기반 단백질 프로파일링(ABPP)의 활용으로, 이는 억제제와 효소 사이의 상호작용을 직접 관찰하고 특성화하기 위해 활동 기반 탐침(ABP)을 사용합니다. 본 연구에서는 전자 친화적 탐침의 예로 인하우스에서 제작한 플루오로포스포네이트(FP) 기반 탐침과 모델 효소로서 돼지 간 에스터라제(PLE)를 사용합니다. 스트렙타비딘 태그를 도입하기 위한 PLE의 간단한 화학적 수정은 바이오틴화된 분석 플레이트에 이를 고정화하고 제시할 수 있게 합니다. 이후 FP 탐침과 상업적으로 유래된 화합물 라이브러리를 사용한 경쟁적 ABPP 실험을 병렬로 실행할 수 있습니다. 이 설정은 신규 억제제를 식별하고 IC50 값을 단일 운영 내에서 추정할 수 있게 합니다. 본 장은 ABPP 탐침의 합성, 효소 용액의 준비, 플레이트 기반 분석의 실행을 위한 종합적인 프로토콜을 제공합니다. 구조나 기질 특이성이 알려지지 않은 효소의 새로운 억제제를 발견하고 특성화하기 위한 강력한 플랫폼을 제공합니다. 이 기술을 적용함으로써, 우리는 잠재적인 약물 후보의 식별을 가속화할 뿐만 아니라 그들의 작용 방식에 대한 깊은 통찰력을 얻어 그들의 치료 가능성에 대한 이해를 높일 수 있습니다.