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아프리카돼지열병 바이러스 A238L 단백질에 대한 단클론 항체의 준비 및 에피토프 매핑

2025-05-02 19:01 | 추천 : 0 | 댓글 : 0
아프리카돼지열병(ASF)은 아프리카돼지열병 바이러스(ASFV)에 의해 발생하는 매우 전염성이 강한 질병으로, 돼지 산업에 치명적인 영향을 미쳤습니다. 현재 이 질병을 통제할 수 있는 효과적인 백신이나 약물은 없습니다. A238L은 아프리카돼지열병 바이러스의 비구조적 단백질로, 체내에서 바이러스의 면역 회피에 관여합니다. 본 연구에서는 A238L 단백질의 원핵 발현 플라스미드인 pET-28a (+)-A238L을 구축했습니다. 이후 유도 발현과 정제를 통해 A238L 단백질을 획득했습니다. 이 단백질로 쥐를 면역화한 후, A238L 단백질에 특이적인 단클론 항체를 선별했습니다. 최종적으로 해당 단백질에 대항하여 지속적으로 단클론 항체를 분비할 수 있는 하이브리도마 세포 클론 5개를 얻었으며, 복강액 역가가 1:100,000에서 1:500,000 범위로 나타났습니다. 5개의 단클론 항체 중 3개는 IgM 중쇄를, 나머지 2개는 kappa 경쇄와 결합된 IgG1 중쇄를 보였습니다. 펩타이드 스캐닝 방법을 이용해, 3개의 단클론 항체(6EA10B4D7, 6EC2D8E8, 6EB1D2B8)가 인식하는 A238L 단백질의 B 세포 선형 에피토프의 위치 181-LSTCISLFTS-190을 효과적으로 식별했습니다. 에피토프 영역은 예측된 단백질 3차 구조 내에서 시각화되었습니다. 중요한 점은, 서열 보존성 분석을 통해 이 에피토프 서열이 여러 ASFV 균주에서 매우 보존적임이 밝혀졌습니다. 따라서 본 연구에서 생성된 단클론 항체는 A238L 단백질의 생물학적 기능을 파악하고 ASFV의 혈청학적 검출을 강화하는 데 있어 귀중한 참조 자료가 될 것입니다.