Mycoplasma hyopneumoniae(Mhp)는 돈폐(Enzootic pneumonia)의 원인균으로, 돼지 기관지의 섬모세포에 부착하여 점액섬모 청소기능을 저해함으로써 만성 호흡기 질환에 기여합니다. 기존 잠긴 배양법으로 배양한 세포에서는 기도 상피의 극성이나 구조적 복합성이 부족해 Mhp의 체외 연구에 한계가 있었습니다. 본 연구에서는 돼지 공기-액체 인터페이스 호흡기 상피세포(ALI-PREC) 모델을 이용해, Mhp 감염 양상, 세포병변 효과(CPEs), 숙주 특이 반응을 조사하였습니다. 6주령 돼지 3두에서 1차 기관상피세포를 분리해 ALI 조건에서 4주 동안 배양, 분화된 유사다층성 섬모상피를 형성했습니다. 이후 ALI-PREC에 Mhp 232균주(5.84, 6.84, 7.84 log CCU/mL)를 각각 2시간 또는 5시간 접종한 뒤, 144시간 동안 관찰하였습니다. 정량 현미경 분석을 통해 총 입자 수, 입자 면적, 평균 크기, 입자에 의해 덮인 비율 등을 측정하고, 대조군과 비교하였습니다. Mhp는 접종 2시간 이내에 상피에 부착하며, 세포 둥글어짐과 응집, 탈락 등 CPE를 유발하고, 감염 농도 및 시간 의존적으로 섬모 운동을 저해하였습니다. 접종 24시간 후에는 상피 내에서, 고농도에서는 상층액에서도 Mhp DNA가 검출되어 상피 장벽 파괴를 확인할 수 있었습니다. 일부 반복실험에서는 섬모 운동이 지속되어, 돼지 개체 간 숙주 반응에서 변이가 있음을 시사합니다. Friis 배지는 ALI-PREC에 유의한 영향을 미치지 않아 감염시험에 적합함을 확인하였습니다. 유전자 발현 분석에서, 72시간 후 섬모 운동 관련 유전자(ROPN1L, LRRC51, CEP162, LRRC6)의 발현이 감소했고, 120시간 후 세포간 접합 유전자(CLDN1, CDH1, CTNND1)는 증가해 상처 치유 반응을 나타냈습니다. ALI-PREC 모델은 Mhp 병원성의 핵심 특징을 반영해 숙주-병원체 상호작용 및 치료 표적 발굴에 유용한 체외 플랫폼임을 입증하였습니다. 중요성: Mhp에 의한 돼지 만성폐렴은 산업적으로 높은 영향을 주지만, 그 병원기전은 충분히 밝혀지지 않았습니다. 초기 감염(균 노출 및 부착) 단계는 기존 세포배양에서 기도 구조나 세포 다양성이 부재해 연구가 어려웠습니다. 본 연구의 체외 모델은 실제 돼지 기도 구조와 세포 구성을 재현했으며, 이 모델에서 Mhp의 신속한 부착, 농도 및 시간 의존적 섬모기능 및 상피장벽 파괴, 이에 따른 섬모운동 및 세포간 접합 유전자 변화가 관찰됐습니다. 특히 돼지 개체 간 세포병변 반응의 자연적 변이를 확인해, 숙주 특이적 요인이 질병 진행에 영향을 미침을 시사하였습니다. 본 연구 결과는 돼지 호흡기 질환의 맞춤형 예방 및 치료전략 개발에 실질적 근거를 제공할 수 있습니다.