돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스(PRRSV)는 외피를 가진 단일 가닥 양성 RNA 바이러스입니다. 이 바이러스가 인코딩하는 비구조적 단백질 1α(nsp1α)는 숙주 면역 반응 회피에 중요한 역할을 합니다. PRRSV nsp1α와 숙주 인자 간의 상호 작용을 탐구하는 것은 바이러스의 면역 회피 메커니즘과 바이러스 통제를 이해하는 데 필수적입니다. 본 연구에서는 돼지 폐 조직을 이용하여 cDNA 라이브러리를 구축하고, 이스트 투 하이브리드(Y2H) 스크리닝을 통해 바이러스 nsp1α와 상호 작용하는 33개의 잠재적인 숙주 단백질을 식별했습니다. 이러한 상호 작용은 유전자 온톨로지와 KEGG 경로 분석을 통해 추가로 분석되었습니다. 공초점 현미경을 통해 프로테아좀이 베타 타입-4(PSMB4), 카르노신 디펩티데이스 2(CNDP2) 및 폴리(rC) 결합 단백질 1(PCBP1)이 바이러스 nsp1α와 공동 위치한다는 것을 밝혀냈습니다. PSMB4와 nsp1α 사이의 상호 작용은 Y2H와 면역침전법을 통해 추가로 확인되었습니다. PRRSV 감염은 Marc-145 세포 및 돼지 폐 대식세포(PAM)에서 PSMB4 발현에 영향을 미치지 않았습니다. PSMB4의 과발현은 농도 의존적으로 nsp1α 단백질 수치를 줄였으며, PRRSV 감염 상황에서 바이러스 N 및 nsp1α 단백질의 축적을 감소시켰습니다. 반면, PSMB4의 발현 억제는 PRRSV 복제를 촉진했습니다. 이 데이터는 PSMB4가 PRRSV에 대한 숙주 제한 인자임을 시사합니다. 구조 예측 및 절단 변이체 실험에서 PSMB4의 성숙 체인 도메인 내 S146과 M148이 nsp1α 결합 및 분해에 중요하다는 것을 발견했습니다. 이 발견은 PRRSV nsp1α가 숙주 단백질과 상호 작용하며, PSMB4가 nsp1α를 특이적으로 결합하여 분해함으로써 PRRSV 복제를 억제한다는 것을 제안합니다.