멧돼지 정액의 동결보존은 양돈 산업에서 매우 중요합니다. 현재 멧돼지 정액의 동결보존에는 2단계(S2) 방법이 주로 사용됩니다. 이 방법에서는 동결보호제를 4°C에서 첨가하여 독성을 감소시키는 것이 특징입니다. 한편, 1단계(S1) 방법은 절차가 더 간단하고 비용이 저렴하며, 필요한 장비의 수도 줄일 수 있다는 장점이 있지만, 동결보호제의 독성이 증가할 수 있습니다. 본 연구는 S1과 S2 평형화 프로토콜을 비교하며, 해동 후 전체 운동성, 생존율, 운동 매개 변수, 세포막 완전성, 항산화 지표, 세포자멸사 및 관련 유전자 발현을 평가하였습니다. 결과적으로 S2는 더 높은 운동성(p < 0.05)을 보였으나, S1은 평균 경로 속도(p < 0.05), 더 우수한 원형질막 완전성(p < 0.05), 더 낮은 말론디알데하이드(MDA) 수준(p < 0.01), 더 높은 총 항산화능(T-AOC)과 카탈라아제(CAT)(p < 0.01), 더 낮은 슈퍼옥사이드디스무타아제(SOD)(p < 0.05), 그리고 감소된 세포자멸사(p < 0.05)를 나타냈습니다. 반면, S2는 Caspase-9, Bax, SOD-2의 발현이 더 높았습니다(p < 0.05). S1 방식은 약간 낮은 운동성에도 불구하고, 막 보호, 항산화 능력, 항-세포자멸사 면에서 우수함을 보여주었습니다. 따라서 S1은 해동 후 운동성 향상을 위한 추가적 개선이 이루어진다면, 대규모 적용에 유망한 방법임을 시사합니다.