아프리카돼지열병(ASF)은 전 세계 양돈 산업에 심각한 위협을 가하는 고병원성 전염병입니다. 현재까지 효과적인 백신이나 치료제가 개발되어 있지 않습니다. 메신저 RNA(mRNA)의 5' 캡 구조는 모든 진핵생물과 많은 바이러스에서 발견되는 중요한 변형으로, 5'에서 3' 방향으로 작용하는 엑소뉴클레아제에 의한 절단으로부터 mRNA를 보호하여 안정성을 높이고 효율적인 번역을 가능하게 합니다. 아프리카돼지열병바이러스(ASFV)의 NP868R 단백질(pNP868R)은 5'-트리포스파테이스(TPase), 구아닐릴트랜스퍼레이스(GTase), 구아닌-N7-메틸트랜스퍼레이스(MTase) 활성을 보유하고 있어 바이러스 전사체에 7-메틸구아노신 RNA 캡(m7GpppN, cap-0) 구조를 제공합니다. 본 연구에서는 EP424R 유전자가 ASFV의 2'-O-리보스 메틸트랜스퍼레이스(2'-O-MTase)를 암호화하며, 바이러스 전사체에 m7GpppNmp-RNA(cap-1) 구조를 부여함을 확인하였습니다. 또한, EP424R 단량체 및 S-아데노실-L-메티오닌(AdoMet, SAM), S-아데노실-L-호모시스테인(AdoHcy, SAH), Sinefungin(SFG)과의 복합체의 결정 구조를 규명하였습니다. 특히 EP424R의 핵심 촉매 잔기(KDKE)를 규명하고, 효소 작용 기전을 명확히 밝혔습니다. 더불어, EP424R의 진핵 발현 플라스미드와 그 돌연변이 플라스미드, 그리고 특정한 작은 간섭 RNA(siRNA)를 활용한 야생멧돼지 폐세포(WSL)에서의 과발현 실험 및 간섭 실험을 통해, 이 유전자가 ASFV 복제에 필수적임을 입증하였습니다. 이러한 역할은 부분적으로 메틸트랜스퍼레이스 활성을 통해 매개됨을 확인하였습니다. 결론적으로, 본 구조 및 생화학적 연구는 ASFV mRNA 캡핑 과정을 규명하였으며, 후속 바이러스학적 분석을 통해 이 유전자의 ASFV 복제에서의 중요성을 확인하고, 항바이러스 표적으로서의 가능성을 제시하였습니다.