돼지의 지역성 폐렴의 주요 원인균인 Mycoplasma hyopneumoniae(M. hyopneumoniae)는 양돈 산업에서 상당한 경제적 손실을 유발하는 주요 병원체입니다. 이 난배양성 병원균은 시험관 내에서 극히 느린 증식을 보이기 때문에 정량화가 어렵습니다. 컬러 변화 단위(CCU), 콜로니 형성 단위(CFU), 유세포 분석, 및 ATP 발광 측정 등을 포함해 여러 정량 방법이 문헌에 보고되어 있으며, 이 중 CCU가 금표준으로 간주되고 있습니다. 그러나 이 기술들 간의 상관관계는 충분히 평가되지 않았습니다. 최근에는 propidium monoazide(PMA) 또는 ethidium monoazide(EMA)를 이용한 생존력 정량적 PCR(v-qPCR)이 생존 박테리아 검출을 위한 신속하고 민감한 대안으로 부상하고 있습니다. 본 연구의 목적은 M. hyopneumoniae의 다양한 정량화 방법을 평가 및 비교하고, 정확한 실시간 정량 방식의 검증과 더불어 이 병원체에 맞는 맞춤형 v-qPCR 분석법을 개발하는 데 있습니다. 3종의 M. hyopneumoniae(232, J, 2010)의 시험관 내 성장 동역학을 CCU, CFU, 유세포 분석, ATP 발광 측정법으로 평가하였습니다. 또한 배양 배지 내 M. hyopneumoniae를 직접 정량할 수 있는 공초점 레이저 주사 현미경(CLSM) 프로토콜을 확립하여, 통제 조건 하에서 유세포 분석 기반 정량의 검증에도 활용하였습니다. 마지막으로, 생존 M. hyopneumoniae의 정량화를 위한 신속한 v-qPCR 분석법을 개발 및 최적화하였습니다. CFU, CCU, 유세포 분석, ATP 발광 측정 등 다양한 방법으로 분석한 성장 동역학은 유사한 성장 패턴과 높은 검사 간 상관성을 보였습니다. 유세포 분석과 CLSM의 정량 결과는 232 균주에서 매우 높은 상관관계(r = 0.9973), J 균주에서 중등도 상관관계(r = 0.8933)를 확인하였습니다. v-qPCR을 통한 생균 검출은 유세포 분석으로 검출된 생균 수와도 강한 상관관계(R² 값: 232: 0.9726; J: 0.8628; 2010: 0.9933, p < 0.05)를 나타냈습니다. v-qPCR 분석법의 232 기준 균주에 대한 검출 한계는 5 × 10⁴개의 생존 M. hyopneumoniae 세포/mL였습니다. 이번 연구는 최초로 mycoplasma 종에 대해 검증된 PMA 기반 v-qPCR 분석법과 함께, 생존/비생존 M. hyopneumoniae 세포의 신속 정확한 분별을 위한 유세포 분석 및 CLSM 프로토콜을 제시하였습니다. 제시된 방법들은 CCU나 CFU에서 4주가 소요되는 정량 시간을 단 수시간 이내로 획기적으로 단축시켰습니다. 아울러, 임상 시료에서 추가 검증이 이루어진다면, v-qPCR은 M. hyopneumoniae 박멸 프로그램에서 매우 유용한 도구로 활용될 수 있을 것입니다.